光漂白

光漂白
光漂白(Photobleaching,亦称为光致褪色)是染料荧光团分子的光化学变化,使其永久不能发出荧光。这是由于共价键断裂或荧光团与周围分子之间的非特异性反应。光漂白不仅在显微术中造成观测上的干扰,还可以应用于研究分子运动和分子扩散现象,如FRAP或FLIP技术。

词语释义

荧光成像的质量很大程度上依赖于荧光信号强度。提高激发光强度可以提高信号强度,但激发光的强度不是可以无限提高的。当激发光的强度超过一定限度时,光吸收就趋于饱和,并不可逆地破坏激发态分子,这就是光漂白现象。在显微术中,光漂白使得观测变得复杂,因为它会造成破坏,使荧光团无法继续放光。此现象造成间歇性拍摄光谱(time-lapse microscopy)观测上的干扰。然而,光漂白也提供了一些应用,例如在quench自发荧光上(主要在antibody-linked),这可以帮助提高信噪比(signal-to-noise ratio)。

控制光漂白

我们可以通过控制光的强度以及照射时间来控制光漂白的现象。或是使用结构较强的荧光团来减少光漂白的现象,例如Alexa Fluors或DyLight Fluors。一个适当让荧光分子被破坏的方法是固定条件(强度x照射时间x循环次数),因为在固定这些条件下,每次吸收放光循环有相同的光漂白期望值