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  • 载体

    载体(vector),指在基因工程重组DNA技术中将DNA片段(目的基因)转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒。载体必需具备:①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制,且对受体细胞无害,不影响受体细胞正常的生命活动。②有多个限制酶切点,而且每种酶的切点最好只有一个,如大肠杆菌pBR322就有多种限制酶的单一识别位点,可适于多种限制酶切割的DNA插入。③含有复制起始位点,能够独立复制;通过复制进行基因扩增,否则可能会使重组DNA丢失。④有一定的标记基因,便于进行筛选。⑤载体DNA分子大小应合适,以便操作。

    编辑摘要

    基本信息 编辑信息模块

    中文名: 载体 目前状况: 使用中
    外文名: vector 拼音: zài tǐ
    中文名: 载体 英文名: vector
    解释: 能传递能量或运载其他物质的物质 本质: DNA分子
    载体分类: 病毒载体、质粒载体、噬菌体载体 常见种类: 细菌质粒、噬菌体和动植物病毒

    目录

    概念/载体 编辑

    把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector) 。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌 细胞中,它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。质粒的复制和转录要依赖于宿主细胞编码的某些酶和蛋白质,如离开宿主细胞则不能存活,而宿主即使没有它们也可以正常存活。质粒的存在使宿主具有一些额外的特性,如对抗生素的抗性等。F质粒(又称F因子或性质粒)、R质粒 (抗药性因子)和COL质粒 (产大肠杆菌素 因子)等都是常见的天然质粒。

    必备条件/载体 编辑

    ①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制,且对受体细胞无害,不影响受体细胞正常的生命活动。
    ②有多个限制酶切点,而且每种酶的切点最好只有一个,如大肠杆菌pBR322就有多种限制酶的单一识别位点,可适于多种限制酶切割的DNA插入。
    ③含有复制 起始位点,能够独立复制;通过复制进行基因扩增,否则可能会使重组DNA丢失。
    ④有一定的标记基因,便于进行筛选。如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因,就可以作为筛选的标记基因。一般来说,天然运载体往往不能满足上述要求,因此需要根据不同的目的和需要,对运载体进行人工改建。现在所使用的质粒载体几乎都是经过改建的。
    ⑤载体DNA分子大小应合适,以便操作。
    基因克隆的载体类型:质粒载体,噬菌体载体,柯斯质粒载体,M13噬菌体载体,噬菌粒载体。

    载体分类/载体 编辑

    质粒载体

    质粒载体图谱质粒载体图谱
    质粒载体是一种相对分子质量较小、独立于染色体DNA之外的环状DNA(一般有1~200 kb左右,kb为千碱基对),有的一个细菌中有一个,有的一个细菌中有多个。质粒能通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移,可以独立复制,也可整合到细菌染色体DNA中,随着染色体DNA的复制而复制。

    噬菌体载体

    利用噬菌体作载体,主要是将外来目的DNA替代或插入中段序列,使其随左右臂一起包装成噬菌体,去感染大肠杆菌,并随噬菌体的溶菌繁殖而繁殖。

    病毒载体

    质粒和噬菌体载体只能在细菌中繁殖,不能满足真核DNA重组需要。感染动物的病毒可改造用作动物细胞的载体。由于动物细胞的培养和操作较复杂、花费也较多,因而病毒载体构建时一般都把细菌质粒复制起始序列放置其中。使载体及其携带的外来序列能方便地在细菌中繁殖和克隆,然后再引入真核细胞。
    现在人们还在不断寻找新的运载体,如叶绿体或线粒体DNA也有可能成为运载体。 

    反载体/载体 编辑

    在很多情况下,一个载体可同时载带几种微量元素,如硫酸钡、氢氧化铁这类沉淀,结果是降低了所需分离物质的纯度。为了在沉淀过程中不载带出其他放射性杂质,广泛应用反载体。它是性质与放射性杂质十分相似的稳定核素或它们的混合物,在分离过程中使放射性杂质大大稀释,不随被分离的对象分出而留在原来的物相中。清除剂能强烈吸附或载带许多放射性核素的物质,在分离过程中用它除去许多放射性核素。
    载体共沉淀法在放射化学发展的早期起过极为重要的作用。在现代放射化学分离 中也常采用不加载体的色谱法 、萃取法。以这种分离方式获得的放射性核素常用“不加载体(no carrier added)”来标志它们的质量品级,即以前的无载体(carrier-free)放射性核素。

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    扩展阅读
    1载体

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