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  • 黄曲霉毒素”是个多义词,全部含义如下:

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    黄曲霉毒素[霉菌毒素]

    黄曲霉毒素(AFT)是一类化学结构类似的化合物,均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉 (aspergillus flavus)寄生曲霉 (a.parasiticus)产生的次生代谢产物,在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。 它们存在于土壤、动植物、各种坚果中,特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品,是霉菌毒素中毒性最大、对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素。 2017年10月27日,世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考,黄曲霉毒素在一类致癌物清单中。

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    基本信息 编辑信息模块

    中文名称: 黄曲霉毒素 外文名: AFT;Aflatoxins
    化学式: C17H12O6 外观: 发绿色荧光
    主要危害: 毒性极强、一类致癌物 相对分子质量: 312.27
    特性: G1,G2发绿色荧光 分布: 土壤,动植物各种坚果

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    发现历史/黄曲霉毒素[霉菌毒素] 编辑

    黄曲霉毒素B1 黄曲霉毒素B1

    20世纪60年代在英国发生的十万只火鸡突发性死亡事件被确认与从巴西进口的花生粕有关.进一步的调研证明,这些花生粕被一种来自真菌的有毒物质污染这些研究工作最终使人们发现了黄曲霉(Aspergillus.flavus)产生的有毒代谢物质。黄曲霉毒素(Aflatoxins).是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物。特曲霉也能产生黄曲霉毒素,但产量较少.产生的黄曲霉毒素主要有B1,B2,G1,G2 以及另外两种代谢产物M1,M2.其中M1 和M2是从牛奶中分离出来的.B1,B2,G1,G2,M1 和 M2 在分子结构上十分接近.。

    1960年,英国发现有10万只火鸡死于一种以前没见过的病,被称为“火鸡X病”,再后来鸭子也被波及。追根溯源,最大的嫌疑是饲料。这些可怜的火鸡和鸭子吃的是花生饼。花生饼是花生榨油之后剩下的残渣,富含蛋白质,是很好的禽畜饲料。

    科学家们很快从花生饼中找到了罪魁祸首,一种真菌产生的毒素。它被命名为“aflatoxin ”。自那以后,黄曲霉毒素就获得了科学家们的特别关照,对它的研究可能是所有的真菌毒素中最深入最广泛的。

    发现的黄曲霉素有十几种。蒙牛介绍给公众的“黄曲霉毒素M1”主要出现在各种奶中。M就是“奶”的意思。它还有一个兄弟M2。

    其实M1和M2并不是黄曲霉菌产生的,毒性也并不是最强。毒性最强的排行“B1”,B表示蓝色,因为它在紫外光的照射下会发出蓝色荧光。除了亲兄弟B2之外,它还有堂兄弟G1和G2,因为在紫外光下发射黄绿色荧光而得名。

    B1 、B2和G1、G2,就是经常经常出现在农产品中的黄曲霉毒素的代表。B1和B2被奶牛吃了之后,分别有一小部分会转化为M1和M2进入奶中。这就是牛奶中黄曲霉毒素的来源。

    黄曲霉毒素在农产品中几乎无法避免,不想饿死的人类也只好无奈地吃下一些。世界各国,都只能设定一个“限量标准”。不超过那个标准,危害就小到可以忽略了。

    花生和玉米是最容易被黄曲霉污染的粮食。这也就是那10万只可怜的火鸡被害的原因。或许会有敏感的读者想到:既然那些花生被污染了,那么它们榨的油呢?

    1966年,就有一篇科学论文探索过这个问题。研究者找了一批严重发霉的花生,其中的黄曲霉毒素B1已经超标到不可思议的地步。食物中的黄曲霉毒素用ppb为单位,1ppb相当于1吨粮食中含有1毫克。中国的现行标准是花生中不超过20ppb,而那批花生中的含量是5500ppb,无异于毒药了。作者用有机溶剂浸取的方法来得到油,发现油中的B1含量是120ppb,虽然比原料中要低得多,但仍然大大高于安全标准。花生饼中的含量则高达11000ppb,如果拿去喂动物,动物就只能追随那批可怜的火鸡了。

    按照工业加工的流程,浸取出来的“粗油”要经过几步精炼。经过了第一步精炼,B1含量降到了10ppb,已经达到食用标准。再经过第二步精炼,含量就低于1ppb,可以忽略了。

    在中国还有很多榨油作坊。压榨出来的油又如何呢?那位研究者也用这批花生进行了压榨,结果是油中的B1超过了800ppb。这么高的原因在于,压榨出的油中会带入一些残渣,而残渣中的黄曲霉毒素含量非常高。同样地,经过两步精炼,油中的黄曲霉毒素基本上会被除去。

    通常的花生当然不可能发霉到这种地步。不过在粮食发生肉眼可见的霉变之前,其中的黄曲霉毒素也可能达到危险的含量。从安全的角度,经过精炼的油是要更加优越的。如果实在喜欢“自己榨”的粗油,应该尽量使用收割之后及时干燥、而且保存良好的花生或者其他油料作物。否则,油中含有的黄曲霉毒素B1,无论是毒性还是含量,都比蒙牛超标牛奶中的M1要高得多了。

    许多人都知道粮食收割之后受潮长霉会产生黄曲霉毒素。其实,黄曲霉毒素在农作物正常的生长期中就可以形成。比如玉米,土壤中的黄曲霉“种子”会在玉米棒中“萌发”。如果那段时间干燥而且高温,黄曲霉毒素的含量就会明显升高。此外,种植太密、野草太多、氮肥不足、虫等因素,也有利于黄曲霉毒素的形成。美国曾经连续几年跟踪过中部一些州的玉米。发现1988年,那些州的玉米中黄曲霉毒素普遍很高。在有些农场的抽检样品中,超过食用标准20ppb的比例甚至高达36%。

    农业生产中,黄曲霉毒素超标的玉米并不少见。如果全部销毁,将会是很大的损失。科学家们也找到了一些使用它们的合理方式。比如可以与不超标的混合,把总的含量降到比较低。这样的做法不能用于人的食物,但对于禽畜饲料是可以接受的。如果超标不是很多,也可以喂给成年的猪、牛、鸡等,黄曲霉素很难残留在肉中。此外,酿酒也是一种出路。经过蒸馏,黄曲霉毒素无法进入酒中。只是,剩下的酒糟中含有很多毒素,也就不能用来做饲料了。

    基本认识/黄曲霉毒素[霉菌毒素] 编辑

    1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为1类致癌物,是一种毒性极强的剧毒物质.黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时可导致肝癌甚至死亡.在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1最为多见,其毒性和致癌性也最强.

    B1是最危险的致癌物,经常在玉米,花生,棉花种子,一些干果中常能检测到。它们在紫外线照射下能产生荧光,根据荧光颜色不同,将其分为B族和G族两大类及其衍生物。AFT已发现20余种。AFT主要污染粮油食品、动植物食品等;如花生、玉米,大米、小麦、豆类、坚果类、肉类、乳及乳制品、水产品等均有黄曲霉毒素污染。

    化学结构/黄曲霉毒素[霉菌毒素] 编辑

    黄曲霉毒素B2 黄曲霉毒素B2

    黄曲霉毒素(Aflatoxins)CAS号 1402-68-2,是一组化学结构类似的化合物,已分离鉴定出12种包括B1,B2,G1,G2,M1,M2,P1,Q,H1,GM,B2a和毒醇.黄曲霉毒素的的基本结构为二呋喃环和香豆素,B1是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物.即含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素).前者为基本毒性结构后者与致癌有关.M1是黄曲霉毒素B1在体内经过羟化而衍生成的代谢产物.黄曲霉毒素的主要分子型式含 B1,B2,G1,G2,M1,M2等.其中M1和M2 主要存在于牛奶中.B1为毒性及致癌性最强的物质.

    《黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2,M1,M2化学结构式》

    黄曲霉毒素B1(CAS号1162-65-8);

    分子式:C17H12O6

    黄曲霉毒素G1 黄曲霉毒素G1

    分子量:312.27黄曲霉毒素B2(CAS号7220-81-7);

    黄曲霉毒素G1(CAS号1165-39-5);

    黄曲霉毒素 G2(CAS号7241-98-7);

    黄曲霉毒素M1(CAS号6795-23-9)

    黄曲霉毒素M2

    物质特点/黄曲霉毒素[霉菌毒素] 编辑

    物化特性

    黄曲霉毒素G2 黄曲霉毒素G2

    在紫外线下黄曲霉毒素B1,B2发蓝色荧光黄曲霉毒素G1,G2发绿色荧光.黄曲霉毒素的相对分子量为312-346.难溶于水易溶于油,甲醇丙酮和氯仿等有机溶剂,但不溶于石油醚己烷和乙醚中.一般在中性溶液中较稳定,但在强酸性溶液中稍有分解在pH9-10的强碱溶液中分解迅速.其纯品为无色结晶,耐高温黄曲霉毒素B1的分解温度为268℃紫外线对低浓度黄曲霉毒素有一定的破坏性.

    毒性极强

    对健康的危害黄曲霉毒素进入体内后,主要在肝细胞内质网微粒体混合功能氧化酶系的作用下进行代谢。黄曲霉毒素没有经过代谢活化是无致癌性的,因曲昔曲霍毒素袖称为前致癌物   .

    远远高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性,其中以B1毒性最大。当人摄入量大时,可发生急性中毒,出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。当微量持续摄入,可造成慢性中毒,生长障碍,引起纤维性病变,致使纤维组织增生。AFT的致癌力也居首位,是目前已知最强致癌物之一。

    检测试剂/黄曲霉毒素[霉菌毒素] 编辑

    操作步骤

    1.将所需试剂从微孔板中取出,放置室温(20~25℃)30min以上,液体试剂使用前均须摇匀。

    2.取出所需数量的微孔板,将不用的微孔板与干燥剂一起重新真空密封,保存于2~8℃。不要冷冻。

    3.洗涤工作液在使用前也需回温。  

    4.将样本和标准品对应微孔编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。

    5.加标准品/样本50ml到对应的微孔中,加入酶标物50ml/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置室温避光环境中反应30min。

    6.小心揭开盖板膜,用洗涤工作液充分洗涤300ml/孔,洗板5次,每次间隔30s,用吸水纸拍干。

    7.加入显色液100ml/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置室温避光环境反应30min。

    8.加终止液50ml/孔,轻轻振荡混匀,设酶标仪于450nm处读每孔OD值。

    注意事项

    1.室温低于20℃或试剂及样本没有恢复到室温(20~25℃)会导致所有标准的OD值偏低。

    2.在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

    3.每种试剂使用前均需摇匀。

    4.反应终止液为2M盐酸,避免接触皮肤。

    5.不要使用过了有效期的试剂盒;也不要掺杂使用过了有效期的试剂盒;不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

    6.储存条件

    7.试剂变质的迹象:显色试剂有任何颜色表明显色剂变质,应当弃之。0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。

    8.加入显色液后,一般显色时间为15~30min。若颜色较浅,可延长反应时间到35min(或更长),但不得超过40min。反之,则减短反应时间。

    9.该试剂盒最佳反应温度为25℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

    试剂盒保存于2~8℃,不要冷冻,将不用的微孔板重新真空密封。标准物质和无色的显色剂对光敏感,因此要避光保存。

    黄曲霉毒素毒性比砒霜大68倍

    黄曲霉毒素被世界卫生组织划定为1类致癌物,毒性比砒霜大68倍,仅次于肉毒霉素,是目前已知霉菌中毒性最强的。据悉,黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物 肝脏组织有破坏作用,严重时可导致肝癌甚至死亡,在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1最为多见,其毒性和致癌性也最强。“B1是最危险的致癌物,经常在玉米,花生,棉花种子,一些干果中常能检测到,其中以花生和玉米污染最严重。家庭自制发酵食品也能检出黄曲霉毒素,尤其是高温高湿地区的粮油及制品种检出率更高。”一名相关人员介绍说。  

    具耐热性

    一般烹调加工温度不能将其破坏,裂解温度为280℃。在水中溶解度较低,溶于油及一些有机溶剂,如氯仿和甲醇中,但不溶于乙醚、石油醚及乙烷。

    临床特征/黄曲霉毒素[霉菌毒素] 编辑

    食品中所污染的主要是黄曲霉毒素B1,其毒性一般认为有三种临床特征;急性中毒、慢性中毒和致癌性:

    (1)急性中毒:

    它是一种剧毒物质,毒性比KCN大10倍,比砒霜大68倍,仅次肉毒霉素,是目前已知霉菌中毒性最强的。它的毒害作用,无论对任何动物,主要变化是肝脏,呈急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。脾脏和胰脏也有轻度的病变。

    (2)慢性中毒:

    长期摄入小剂量的黄曲霉毒素则造成慢性中毒。其主要变化特征为肝脏出现慢性损伤,如肝实质细胞变性、肝硬化等。出现动物生长发育迟缓,体重减轻,母畜不孕或产仔少等系列症状。

    (3)致癌性:

    AFT是目前所知致癌性最强的化学物质

    其致癌特点是:

    黄曲霉毒素M1 黄曲霉毒素M1

    A 致癌范围广,能诱发鱼类、禽类,各种实验动物、家畜及灵长类等多种动物的实验肿瘤;

    B 致癌强度大,其致癌能力比六六六大1万倍;

    C 可诱发多种癌,AFT主要诱发肝癌,还可诱发胃癌、肾癌、泪腺癌、直肠癌、乳腺癌,卵巢及小肠等部位的肿瘤,还可出现畸胎。

    主要来源/黄曲霉毒素[霉菌毒素] 编辑

    黄曲霉毒素是黄曲霉、寄生曲霉等产生的代谢产物。当粮食未能及时晒干及储藏不当时,往往容易被黄曲霉或寄生曲霉污染而产生此类毒素。

    分布特点/黄曲霉毒素[霉菌毒素] 编辑

    黄曲霉毒素M2 黄曲霉毒素M2

    黄曲霉毒素存在于土壤,动植物各种坚果,特别是花生和核桃中。在大豆、稻谷、玉米、通心粉、调味品、牛奶、奶制品、食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素。一般在热带和亚热带地区,食品中黄曲霉毒素的检出率比较高。在中国,产生黄曲霉毒素的产毒菌种主要为黄曲霉。1980年测定了从17个省粮食中分离的黄曲霉1660株,广西地区的产毒黄曲霉最多检出率为58%。总的分布情况为:华中、华南、华北产毒株多,产毒量也大;东北、西北地区较少。

    产菌及产毒条件/黄曲霉毒素[霉菌毒素] 编辑

    黄曲霉毒素的产生菌及产毒条件能够产生黄曲霉毒素的最主要的菌种是黄曲霉和寄生曲霉,此外曲霉属的黑曲霉、灰绿曲霉、赭曲霉等,青霉属的桔青霉、扩展青霉、指状青霉等,毛霉,镰孢霉,根霉,链霉菌等也能产生黄曲霉毒素。它们产生黄曲霉毒素的条件如下:基质、温度、pH、相对湿度  

    物质代谢/黄曲霉毒素[霉菌毒素] 编辑

    分布与排泄

    黄曲霉毒素进入机体后,在肝脏中的量较其他组织器官为高,说明肝脏可能受黄曲霉毒素的影响最大。肾脏、脾脏和肾上腺也可检出,肌肉中一般不能检出。黄曲霉毒素如不连续摄入,一般不在体内积蓄。一次摄入后约1周即经呼吸、尿、粪等将大部分排出。

    代谢

    AFB1在动物体内经细胞内质网微粒体混合功能氧化酶系代谢,在微粒体混合功能氧化酶系的作用下AFB1发生脱甲基、羟化及环氧化反应主要代谢产物为AFM1.AFP1.AFQ1和AFB1-2,3-环氧化物。

    造成危害/黄曲霉毒素[霉菌毒素] 编辑

    概述

    黄曲霉毒素对人和动物健康的危害均与黄曲霉毒素抑制蛋白质的合成有关.黄曲霉毒素分子中的双呋喃环结构是产生毒性的重要结构.研究表明,黄曲霉毒素的细胞毒作用是干扰信息RNA和DNA的合成,进而干扰细胞蛋白质的合成导致动物全身性损害(Nibbelink,1988).黄光琪等(1993)研究指出黄曲霉毒素B1能与tRNA结合形成加成物,黄曲霉毒素-tRNA加成物能抑制tRNA与某些氨基酸结合的活性对蛋白质生物合成中的必需氨基酸,如赖氨酸亮氨酸,精氨酸和甘氨酸与tRNA的结合均有不同的抑制作用,从而在翻译水平上干扰了蛋白质生物合成影响细胞代谢..

    黄曲霉毒素与动物疾病

    黄曲霉毒素中毒(Aflatoxicosis)主要对动物肝脏的伤害,受伤害的个体因动物种类年龄,性别和营养状态而异.研究结果表明黄曲霉毒素可导致肝功能下降,降低牛奶产量和产蛋率.并使动物的免疫力降低易受有害微生物的感染.此外,长期食用含低浓度黄曲霉毒素的饲料也可导致胚胎内中毒.通常年幼的动物对黄曲霉毒素更敏感.黄曲霉毒素的临床表现为消化系统功能紊乱降低生育能力.降低饲料利用率,贫血等.黄曲霉毒素不仅能够使奶牛的产奶量下降而且还使牛奶中含有转型的黄曲霉毒素M1和M2.据美国农业经济学家统计,由于食用黄曲霉毒素污染的饲料每年至少要使美国畜牧业遭受10%的经济损失.在中国,由此而带来的畜牧业损失可能会更大.黄曲霉毒素能导致家禽法氏囊和胸腺萎缩,皮下出血,反应差,抵抗力下降,疫苗失效,度疫病感受性提高,蛋变小,蛋黄重量变低,受精率、孵化率降低,胚胎死亡增加及不健康,。对家畜引起生长缓慢,饲料率下降,黄疸,皮毛粗糙,低蛋白血症,肝癌和免疫抑制

    黄曲霉毒素与人类的健康

    人类健康受黄曲霉毒素的危害主要是由于人们食用被黄曲霉毒素污染的食物.对于这一污染的预防是非常困难的其原因是由于真菌在食物或食品原料中的存在是很普遍的.国家卫生部门禁止企业使用被严重污染的粮食进行食品加工生产,并制定相关的标准监督企业执行.但对于含黄曲霉毒素浓度较低的粮食和食品无法进行控制.在发展中国家食用被黄曲霉毒素污染的食物与癌症的发病率呈正相关性.亚洲和非洲的疾病研究机构的研究工作表明,食物中黄曲霉毒素与肝细胞癌变 (Liver Cell Cancer,LCC) 呈正相关性.长时间食用含低浓度黄曲霉毒素的食物被认为是导致肝癌胃癌,肠癌等疾病的主要原因.1988年国际肿瘤研究机构(International Agency for Research on Cancer,IARC) 将黄曲霉毒素B1列为人类致癌物.除此以外黄曲霉毒素与其它致病因素(如肝炎病毒)等对人类疾病的诱发具有叠加效应.

    黄曲霉毒素Bl的半数致死量为0.36毫克/公斤体重,属特剧毒的毒物范围(动物半数致死量<10毫克/公斤=它的毒性比氰化钾大10倍比砒霜大68倍).它引起人的中毒主要是损害肝脏,发生肝炎肝硬化,肝坏死等.临床表现有胃部不适食欲减退,恶心呕吐,腹胀及肝区触痛等;严重者出现水肿昏迷,以至抽搐而死.黄曲霉毒素是目前发现的最强的致癌物质.其致癌力是奶油黄的900倍比二甲基亚硝胺诱发肝癌的能力大75倍,比3,4苯并芘大4000倍.它主要诱使动物发生肝癌也能诱发胃癌,肾癌直肠癌及乳腺,卵巢小肠等部位的癌症.

    检验检疫/黄曲霉毒素[霉菌毒素] 编辑

    国家要求

    ● 1995年,世界卫生组织制定的食品黄曲霉毒素最高允许浓度为15ug/kg.

    ● 中国政府对各种食物中黄曲霉毒素的最高允许量见表2.

    表2 中国对食品中黄曲霉毒素的最高允许含量

    食 物 名 称

    最高允许含量/(ug/kg)

    玉米花生,花生油,坚果和干果(核桃杏仁)

    20(黄曲霉毒素B1)

    玉米,花生仁制品(按原料折算)

    20(黄曲霉毒素B1)

    大米其他食用油(香油,菜籽油大豆油,葵花油胡麻油,茶油麻油,玉米胚芽油米糠油,棉籽油)

    10(黄曲霉毒素B1)

    其他粮食(麦类面粉,薯干),发酵食品(酱油食用醋,豆豉腐乳制品),淀粉类制品(糕点饼干,面包裱花蛋糕)

    5(黄曲霉毒素B1)

    牛乳及其制品(消毒牛奶,新鲜生牛乳全脂牛奶粉,淡炼乳,甜炼乳奶油,黄油)新鲜猪组织(肝,肾血,瘦肉)

    0.5(黄曲霉毒素M1)

    ● 美国联邦政府有关法律规定人类消费食品和奶牛饲料中的黄曲霉毒含量(指B1+B2+G1+G2的总量)不能超过15μg/kg.人类消费的牛奶中的含量不能超过0.5μg/kg,其他动物饲料中的含量不能300μg/kg。

    ● 而欧盟国家规定更加严格落花生和坚果及其加工产品和所有谷类食品及加工产品中黄曲霉毒素B1限量为2.0μg/kg;原奶、热处理奶及加工奶产品中M1限量为0.050μg/kg;婴儿食品(包括婴幼儿奶)中M1限量为0.025μg/kg。”

    通用方法

    薄膜层析法和液相色谱法是目前国内绝大多数检测机构都在使用的方法。由于其检测周期长,程序复杂所需试剂繁多等缺点已远远不能满足现代检测要求.随着现代科学技术的不断发展,特别是免疫学生物化学,分子生物学的不断发展人们已创建了不少快速,简便特异,敏感低耗且适用的黄曲霉毒素检测方法.而且以金标试纸为代表的这些方法已经被先进国家所广泛使用,引进和消化这些先进的方法是我们检测领域的当务之急.免疫亲和柱法优点很多但由于检测费用过高,而无法普及.而一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法似乎更适用于中国值得推广。

    其余方法

    1、薄层层析法

    薄层层析(Thin-Layer Chromatography,TLC)是在黄曲霉毒素研究方面应用最广的分离技术.自1990年它被列为AOAC (Association of Official Agricultural Chemists)标准方法,该方法同时具有定性和定量分析黄曲霉毒素的功能.

    2、液相色谱法

    液相色谱(Liquid Chromatography,LC)与薄层层析在许多方面具有相似性二者互相补充.通常用TLC进行前期的条件设定,选择适宜的分离条件后再用LC进行黄曲霉毒素的定量测定。

    3、免疫化学分析方法

    利用具有高度专一性的单克隆抗体或多克隆抗体设计的黄曲霉毒素的免疫分析方法也是最常用的黄曲霉毒素检测方法.这类方法通常包括放射免疫分析方法(Radioimmunoassay,RIA),酶联免疫法(Enzyme-linked of Immunosorbent Assay,ELISA)和免疫层析法(Immunoaflinity Column Assay,ICA).它们均可以对黄曲霉毒素进行定量测定。

    (1) 免疫亲和柱-荧光分光光度法和免疫亲和术-HPLC法

    免疫亲和柱法和酶联免疫吸附法虽然都可达到速简便效果但酶联免疫吸附法仅能检测单一毒素(如黄曲霉毒素B1)含量,而且易出现假阳性结果难以控制.免疫亲和柱法(包括荧光光度法和HPLC法)却能达到既定量准确又快速简便的要求。

    免疫亲和柱的使用可以避免传统TLC和HPLC的缺点,同时免疫亲和柱与TLC和HPLC法结合可以大大提高工作效率提高灵敏度和准确度。

    黄曲霉毒素免疫亲和柱-荧光光度计法是以单克隆免疫亲和柱为分离手段,用荧光计紫外灯作为检测工具的快速分析方法。它克服了TLC和HPLC法在操作过程中使用剧毒的真菌毒素作为标定标准物和在样品预处理过程中使用多种有毒,异味的有机溶剂毒害操作人员和污染环境的缺点.同时黄曲霉毒素免疫亲和柱-荧光光度计法分析速度快,一个样品只需10-15min,比传统方法快几个小时甚至几天时间;仪器设备轻便容易携带自动化程度高,操作简单直接读出测试结果,可以在小型实验或现场使用.可以进行黄曲霉毒素总量 (B1B2G1G2) 的测定检测限可达到1ug/kg,达到黄曲霉毒素标准限量值以下测定范围为1-300ug/kg。

    黄曲霉毒素免疫亲和柱-高效液相色谱法比传统的HPLC法更加安全可靠,灵敏度和准确度高。它采用单克隆抗体免疫技术可以特效性地将黄曲霉毒素或其他真菌毒素分离出来,分离效率和回收率高。

    分析原理试样中的黄曲霉毒素用一定比例的甲醇/水提取液经过过滤稀释后,用免疫亲和柱净化以甲醇将亲和柱上的黄曲霉毒素淋洗下来,在淋洗液中加入溴溶液衍生以提高测定灵敏度,然后用荧光分光光度计进行定量。也可以将甲醇-黄曲霉毒素淋洗液的一部分注入HPLC中对黄曲霉毒素B1,B2,G1,B2分别进行定量分析.免疫亲和柱是用大剂量的黄曲霉毒素单克隆抗体固化在水不溶性的载体上然后装柱而成.该方法的测定范围0-300ug/kg。

    (2) 酶联免疫吸附法:

    1996年,Nakane 建立了辣根过氧化物酶标记抗体的测定技术.由于该方法简便敏感,特异可作为多种抗原或抗体的测定,20世纪70年代后期该方法引入真菌毒素的检测中,下面介绍的是竞争性酶联免疫吸附间接法检测黄曲霉毒素B1。

    原理:将已知抗原吸附在固态载体表面洗除末吸附抗原,加入一定量抗体与待测样品(含有抗原)提取液的混合液竞争培养后,在固相载体表面形成抗原抗体复合物.洗除多余抗体成分然后加入酶标记的抗球蛋白的第二抗体结合物,与吸附在固体表面的抗原抗体结合物相结合再加入酶底物。在酶的催化作用下,底物发生降解反应产生有色物质,通过酶标检测仪测出酶底物的降解量从而推知被测样品中的抗原量。

    (3) 微柱筛选法

    可以用来半定量测定各种食品中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2的总量。

    原理 样品提取液中的黄曲霉毒素被微柱管风硅镁型吸附层吸附后在波长365nm紫外光灯下显示蓝紫色荧光环,其荧光强度与黄曲霉毒素在一定的光密度范围内成正比例关系.若硅镁型吸附剂层未出现蓝紫色荧光则样品为阴性(方法灵敏度为5-10ug/kg).由于在微柱上不能分离黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2,所以测得结果为总的黄曲霉毒素含量。

    (4) 一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法

    一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法。由此产生的一步式黄曲霉毒素快速检测试纸可在5—10分钟完成对样品中黄曲霉毒素的定性测定.借助黄曲霉毒素标准样品这种方法能估算黄曲霉毒素的含量,非常适用于现场测试和进行大量样品的初选。

    抵抗方法/黄曲霉毒素[霉菌毒素] 编辑

    著名医学杂志Carcinogenesis在2007年刊登了一项研究,其中发现天然叶绿素可以抑制黄曲霉毒素B1引起的大鼠多器官致癌作用。研究者表示,叶绿素的抗癌机制可能是因为它能大幅度减少黄曲霉毒素的吸收率,从而抑制了黄曲霉毒素对肝脏DNA的加成作用。他们认为,叶绿素是一种极好的化学保护物质,对抗致癌物的作用非常有效,从减少吸收,到减少致癌物与遗传物质的作用,直到减少各组织的癌前病变出现,各环节都有明显的效果。

    当然,这只是一项动物研究,对人体来说,叶绿素是不是也有同样的作用呢?在大鼠试验的启发下,2009年的Cancer Prevention Research杂志上发表了一项人体试验研究,它证明,在人类志愿者当中,叶绿素一样能够有效地对抗黄曲霉毒素的致癌作用。研究者们给志愿者服用微量14C标记的黄曲霉毒素B1胶囊,然后正常进食和饮水,测定他们在72小时之内对黄曲霉毒素的吸收和代谢情况。过若干天后,给志愿者同样服用这种黄曲霉毒素胶囊,但再加上叶绿素或者叶绿酸。结果和大鼠试验相当类似,叶绿素和叶绿酸能大大降低黄曲霉毒素的吸收率。

    快速辨别/黄曲霉毒素[霉菌毒素] 编辑

    黄曲霉素是很苦的,食用花生、核桃等食物时如果感觉很苦,马上吐出来,并漱口。发霉的花生、核桃等都容易产生黄曲霉素。  

    预防措施/黄曲霉毒素[霉菌毒素] 编辑

    防霉霉菌生长繁殖需要一定的温度、湿度、氧气及水分含量,如能控制这些因素的其中之一,即可达到防霉的目的;去毒对黄曲霉毒素;含量超过国家标准规定的粮油食品必须进行去毒处理。目前常用的去毒方法有物理去除法、化学去除法和生物去除法:a物理去除b化学去除法c生物学脱毒方法   。

    超标事件/黄曲霉毒素[霉菌毒素] 编辑

    2011年12月24日,国家质量监督检验检疫总局公布了对全国液体乳产品进行抽检结果的公告,蒙牛乳业(眉山)有限公司生产的一批次产品被检出黄曲霉毒素M1超标140%。

    此次涉事的四川眉山工厂在2008年4月全面启动,其一期项目总投资3亿元,设计能力为日处理鲜奶800吨。

    此事发生后,蒙牛在25日凌晨及晚上9点钟两次连发道歉声明。

    2011年12月26日,蒙牛副总裁卢建军解释称,“黄曲霉素是因为眉山地处四川,多阴雨天气,个别供方对饲料管理不当,霉变导致牛奶产生黄曲霉素。”

    2011年12月27日在植物油产品中, 广东省有3个产品的部分批次抽检不及格,分别是云浮市云城区满意花生油厂的花生油(压榨)、云城区富盛粮油厂的花生油(压榨)和高要市孖宝油有限公司的花生油(2.73L/瓶),原因均为黄曲霉毒素B1指标不合格。

     

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