细胞脱核技术

细胞脱核技术
细胞脱核技术指人工将核从细胞中除去的一项新技术。细胞经松胞菌素B(CytochalasinB;CB)以10mg/L的浓度浸没,以12000r/min离心15~20分钟,细胞核可从细胞中分离出来,可使99%的细胞发生脱核,形成无核细胞质体(Cytoplast)和无胞质的核质体(Nucleoplast),可用于做多种研究,如细胞融合、胞质、胞膜、胞核的成分分析以及开展染色质基因转移技术等。

一般过程

准备工作

(1)将CB溶于二甲基亚砜中(DMSO),即1mLCB加1mLDMSO作为母液,4℃可存放三年,使用时以1:100加入培养基中,使其最终浓度为10μg/mL。
(2)培养用的塑料圆板的处理:用无毒的Polystyrene塑料圆板,厚度需1~1.5mm大小可随离心管直径大小而定,只需比离心管口径略小1~1.5mm,圆板两侧要有两个凹陷以便用镊子挟取,为了便于圆板的支撑和平衡离心,在离心管中加入一个圆筒状的塑料垫圈,垫圈高2~2.5cm,周边厚度为2cm,其外径应与圆板的大小相当,使其与离心管的口径略小,在离心管中可方便插入和取出,离心前应先把垫圈投入离心管中,把圆板稳固地扣盖在垫圈上(令其细胞朝下),然后加入CB液略超过圆板,以浸没细胞。