在进行等位酶分析之前,我们必须知道生物体的倍性和酶的亚基组成。无论生物体的遗传背景如何,对于一个特定的酶来说,其亚基组成一般是不变的。酶的底物并不是绝对专一性的,特别是脱氢酶。
酶分析
由于酶是基因编码的产物,它在电场中迁移率的改变反映了酶蛋白的大小构形和肽链氨基酸的序列变化,即编码DNA顺序上的变化,所以可通过分析酶谱的变化来获得我们所需要的遗传信息。在酶谱分析中,等位酶是常用的分析工具。等位酶(Allozyme)是“等位基因酶”的简称,是从同工酶中派生出来的,它与同工酶既有区别又有联系。同工酶是催化同一生化反应的、但在电场中的运动性质有所不同的同种酶的不同表现形式。这是由于构成蛋白质亚基的氨基酸组成和顺序有所不同而造成的。这一概念是广义的,它包括不同基因座位和同一基因座位的不同等位基因所编码的同一种酶,以及转录后酶变体的所有电泳后的表现型。近期文献所提到的同工酶则是狭义的,仅指由不同基因座位所编码的同一种酶的不同形式。由于多数酶的不同形式是共显性的,一个基因座位上两个或多个等位基因是能表达的,它们所编码的多肽链在凝胶上作为酶基因的表现型都能显示出谱带而被看见,因此可将它们作为遗传学研究对象。以下将介绍同工酶分析的一些技术和方法。 等位酶分析
虽然酶谱含有重要的遗传信息,但酶带的产生既有它的遗传背景,也会受生理(发育阶段和存在的组织器官)、各种实验因素(染色方法、酶的浓度、电泳分辨率等)的影响。要想通过酶谱获取基因水平的有用信息,必须在进行等位酶分析时运用一定的方法和原则。